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MMA Focurose FF是一种多模式生物分离介质,主要应用于单抗的中度纯化和精细纯化(用于去除Protein A纯化后样品中的Protein A*、二聚体、多聚物、宿主细胞蛋白、核酸),也可以应用于其它生物分子的精细纯化(去除二聚体、多聚物、宿主细胞蛋白、核酸等)。
*:在Protein A-4HF使用过程中可能脱落的极微量Protein A
1 产品介绍
图1:MMA Focurose FF的配基是一种多模式配基,它与目标分子存在许多类型的相互作用,主要是离子作用(强阴离子作用),其次是氢键作用和疏水作用等。
特点:
a.在高电导条件下结合带电分子,样本不再受电导的限制,样本不需要前处理就可进行离子交换。
b.载量高,采用流穿模式时具有更高处理量。
c.和传统离子交换介质相比,具有新的选择性。
表1:MMA Focurose FF 性能参数
名称 | MMA Focurose FF |
基质 | 高度交联6%琼脂糖 |
粒径范围 | 45-165µm |
平均粒径 | 90±5µm |
介质类型 | 复合模式 |
离子载量 | 130-200umol Cl-/ml 介质 |
pH稳定性 | 2-14(短期)4-12(长期) |
操作压力 | ≤0.3MPa |
最大流速 | ≧300cm/h |
化学稳定性 | 所有常用缓冲液、1.0M氢氧化钠、8M尿素、6M盐酸胍、70%乙醇 避免使用氧化剂、阳离子去污剂、阳离子缓冲液 |
贮存溶液 | 20%乙醇 |
贮存温度 | 4-30℃ |
2 选择指导
2.1 离子交换介质的选择
图2:离子交换介质的选择
说明:
a.当目标物所在溶液的pH˂目标物的等电点时,选择阳离子交换介质。
b.当目标物所在溶液的pH˃目标物的等电点时,选择阴离子交换介质。
c.所使用溶液的pH应该在离子交换介质的使用pH范围以内。
2.2 缓冲溶液的选择
表2:推荐缓冲液
pH范围 | 缓冲盐1 | 浓度2(mM) |
4.0-5.0 | Acetate | 20-100 |
4.0-6.0 | Citrate | 20-200 |
5.5-6.5 | Bis-Tris | 20-50 |
6.0-7.5 | Phosphate | 20-200 |
7.5-8.5 | Tris | 20-50 |
8.5-10.5 | Glycin-NaOH | 20-100 |
说明:
a.选择的缓冲液和盐可能会干扰性能。
b.电导调节可以通过添加盐或改变缓冲液的浓度。
c.在溶液配制后,须经过滤(平均粒径<45µm,用0.22µm过滤;45µm<平均粒径<165µm,用0.45µm过滤;平均粒径>165µm,用0.8µm过滤)和脱气处理(超声或负压)。
3 样品的制备
样品所在溶液要和平衡液保持一致,可以用平衡液稀释或透析/超滤/G25进行缓冲液置换。
样品过滤(平均粒径<45µm,用0.22µm过滤;45µm<平均粒径<165µm,用0.45µm过滤;平均粒径>165µm,用 0.8µm过滤)。
4 纯化流程(以XK16/10为例)
采用液滴对液滴(避免引入气泡)的方式将柱子连接到层析系统上。
用平衡液以5ml/min的流速冲洗5CV(CV指柱床体积,下同)。
用洗脱液以5ml/min的流速冲洗5CV。
用平衡液以5ml/min的流速冲洗10CV。
将样品以5ml/min的流速上样。
用平衡液以5ml/min的流速冲洗10CV。
用洗脱液以5ml/min洗脱5CV或20CV(根据前期筛选实验数据,采用阶梯式洗脱5CV/线性梯度洗脱20CV)。
用再生液以5ml/min的流速冲洗5CV。
备注:再生液=平衡液+2M NaCl,其它组分不变
5 放大
保持柱床高度不变
5.2 保持线性流速不变
备注:若实际情况和实验室数据有偏差,可以维持停留时间不变。
6 维护
6.1平衡
柱子装填完成后,用平衡液以60cm/h的流速冲洗5CV或冲洗至电导和pH值恒定。
6.2再生
每次分离纯化后,用再生液以60cm/h的流速冲洗5CV或冲洗至电导和pH值恒定。
6.3在位清洗
在位清洗用于清洗再生没有清洗干净的物质,例如脂类、沉淀物、变性蛋白。
a.强离子结合蛋白
用2.0M NaCl以60cm/h的流速反向冲洗5CV。
b.沉淀物、疏水结合蛋白、脂蛋白
用1.0M NaOH以30cm/h的流速反向冲洗5CV。
c.脂类、强疏水蛋白。
用1.0M NaOH,30%异丙醇以30cm/h的流速反向冲洗5CV
6.4消毒
用1.0M NaOH以30cm/h的流速反向冲洗5CV。
6.5灭菌
将介质置换到0.5M NaCl ,pH 7.0的溶液中进行高压灭菌。
6.6保存
介质在20%乙醇中4-30℃保存。
7 订购信息
表3:订购信息表
产品 | 规格 | 货号 |
MMA Focurose FF | 25ml | HF060309025M |
MMA Focurose FF | 100ml | HF060309100M |
MMA Focurose FF | 500ml | HF060309500M |
MMA Focurose FF | 1L | HF060309001L |
MMA Focurose FF | 5L | HF060309005L |
MMA Focurose FF | 20L | HF060309020L |
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